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细胞PKC激酶活性光谱法定量检测试剂盒的技术背景
阅读次数:802次 发布时间:2021/6/25 10:44:10
蛋白激酶C(protein kinase C;PKC;EC2.7.11.13),,属于丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine protein kinase;EC2.7.11.1)家属的成员,是哺乳动物细胞信号的重要分子。PKC拥有10个同工酶,包括经典型PKC(classical PKC;cPKC),需要钙离子、二乙酰基甘油(DAG)和磷脂激活,例如α,βI, βII和γ;新型PKC(novel PKC;nPKC),仅需要二乙酰基甘油(DAG)激活,例如δ,ε,η和θ;以及非典型PKC(atypical PKC;aPKC),例如ζ,ι 和λ。所有同工酶具有70%的氨基酸序列同源性。磷酸化下游蛋白后,可以达到肌肉收缩、腺体分泌、糖原分解、血小板凝结等信号传递功能。
其磷酸化目标序列为RRGRTGRGRRGIFR。基于底物RRGRTGRGRRGIFR,在ATP的存在下,受到PKC激酶的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的变化(340nm),来定量分析蛋白激酶C的活性。其反应方式为:
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