人IFN-γR1-CDw119（）ELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人IFN-γR1-CDw119（）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人IFN-γR1-CDw119（）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

奶酪样品（稀释倍数：20）

1.用天平称取2g样品，加去离子水40ml

2.震荡5分钟，使充分溶解

3.用冷冻离心机（3000g，10℃）离心10分钟

4.离心后取下层100μl用于检测

黄油、炼乳等脂肪高样品（稀释倍数：20）

1.用天平称取1g样品，加入5ml正己烷，混合均匀

2.加入20ml去离子水

3.震荡5分钟，使充分溶解

4.用冷冻离心机（3000g，10℃）离心10分钟

5.离心后取下层100ul用于检测

Elisa实验检测程序（注意标准及样品做重复，可以提高检测的准确度及jing确度）

1.开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温，准备洗液：把10倍的洗液加入270ml水。

2.取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。

3.加入100ul的样品溶液及标准液到对应的微孔中（确保使用一次性干净吸头）。

4.轻轻混合30秒，室温下孵育30分钟。

5.不要洗板，加入100ul的酶标记物至每个微孔中。

6.轻轻混合30秒，室温下孵育15分钟。

7.倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后倒掉，重复3次，共4次洗板。zui后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。

8.每孔中加入100ul的底物溶液。

9.室温下孵育30分钟。

10.每孔中加入100ul停止液。

11.450nm读吸光度值。

Elisa试剂盒实验结果判断

1.半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉毒素M1含量大于此标准的黄曲霉毒素M1的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉毒素M1含量小于此标准的黄曲霉毒素M1的浓度。

2.定量结果判定，需要以标准的吸光率为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光率的点用直线连接，根据样品的吸光率在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光率大于*小标准的吸光率或小于zui大标准的吸光率，即可说明此样品中黄曲霉毒素M1的含量小于2ppt或大于60ppt。

ELISA快速检测试剂盒操作技术相关的注意事项

⑴ 务必严格按照XXXX说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30～60min。

⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗che底。

(3)封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板”的出现。

(4)用洗板机洗板时，bao证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后zui好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干：还要防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。

(5)合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

(7)显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

(9)应bao证C清洁，整个操作过程中bao证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至zui低限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。

原创作者：上海极威生物科技有限公司