人L-精氨酸（L-Arg）ELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人L-精氨酸（L-Arg）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人L-精氨酸（L-Arg）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

ELISA实验样品处理方法：

（1）牛奶样品（稀释倍数:20）

1.取牛奶样品，用冷冻离心机（3000g，10℃）离心10分钟去除脂肪（没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）

2.离心后取下层脱脂牛奶100ul到1.9ml水中，混匀

3.取100ul用于检测

（2）奶粉样品(稀释倍数：20)

1.用天平称取2g奶粉，加去离子水40ml（还原牛奶）

2.震荡5分钟，使充分溶解

3.用冷冻离心机（3000g，10℃）离心10分钟

4.离心后取下层脱脂奶用于检测（每孔100μl）

（3）酸奶样品（稀释倍数：20）

1.  取酸奶样品，用冷冻离心机（3000g，10℃）离心10分钟去除脂肪（没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）

2. 离心后取下层脱脂牛奶100ul到1.9ml水中，混合均匀

3. 取100ul用于检测

ELISA实验样品前处理：

组织（猪肝、猪肉、鱼、虾等），蜂蜜样本的处理方法

1）称取1±0.05g均质样本于离心管中，加入4m

去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；

2）在37℃过夜孵育(约16小时)或50℃（超过50℃时会影响分层效果）水浴孵育3小时；

3） 分别加入5ml 0.1M磷酸氢二钾溶液，0.4ml 1M  氢氧化钠溶液和5ml的乙酸乙酯，振荡5分钟；

4）室温下4000转/分，离心10分钟；

5）取出2.5ml的上层液到另一个离心管中，50-60℃氮气或空气吹干；

6）用1ml正已烷溶解残留物，加入1ml复溶液充分振荡混合30秒；室温4000转/分，离心10分钟；

7）上层为正已烷，取下层样本液用于分析。

样本稀释倍数：2

5. 酶联免疫实验设计：

1） 将所有试剂升至室温20-25℃，一旦开始实验，一定要连续不间断。

2） 所有标准液和待测样为减少操作误差，zui好同时做平行实验。

3） 检测样品建议做平行实验（可以减少实验过程中因操作失误而影响实验结果）。

原创作者：上海极威生物科技有限公司