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哈尔滨人NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)ELISA检测试剂盒2022年
阅读次数:1843次 发布时间:2022/12/27 10:56:03
人NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
人早期前列腺癌抗原-2(EPCA-2) ELISA检测试剂盒组成:
1.微孔酶标板2.标准品 3.标准品稀释液4.样本稀释液5.检测抗体-HRP6.缓冲液7.底物A8.底物B9.终止液10.封板膜11.说明书12.自封袋
注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:160、80、40、20、10、5pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
原创作者:上海极威生物科技有限公司
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