人N端前脑钠素（NT-proBNP）ELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人N端前脑钠素（NT-proBNP）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人N端前脑钠素（NT-proBNP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

【检测前准备工作】

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温后方可进行试验。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回 。

3. 人IL-2标准品: 加入标准品稀释液1.0ml至冻干人IL-2标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为1000 pg/ml)，之后在管身标注①，然后根据需要进行稀释。(建议标准曲线使用以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6 pg/ml)。注意：务必要bao证冻干标准品che底溶解和混匀。

4. 标准品稀释方法图例： 取7支洁净的试剂管，分别标注②,③,④,⑤,⑥,⑦,⑧.  每管加入300μl标准品稀释液。从第①管内取出300μl加入到第②管，混匀后，再从第②管取出300μl加入到第③管，以此类推至第⑦管。第⑧管为标准品稀释液，作为阴性对照使用。

                                                                注：复溶标准品原液（1000 pg/ml）请废弃，不可重复使用。

5.生物素化人IL-2抗体工作液：按当次试验所需用量，用抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)，配置成生物素化抗体工作液。使用前30分钟准备。仅供当日使用。

6.酶结合物工作液：按当次试验所需要用量，用酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物(1:100)，配置成酶结合物工作液。使用前30分钟准备。仅供当日使用。

7.TMB显色工作液：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份（9：1）的比例配制TMB显色工作液。

 【洗涤方法】

1．自动洗板机：要求注入的洗涤液为350μl，注入与吸出间隔20－30秒。确保机器运用熟练后，再投入实验中使用。

2．手工洗板：每孔加洗涤液350μl，静置30秒后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干。手工洗板时，注意加入洗液的过程中，不要造成孔间污染，从而出现跳孔的现象。 

原创作者：上海极威生物科技有限公司