注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品内容：

微量法

试剂一：葡萄糖 9mg×1支，4℃保存；临用前加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液，用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液-20℃ 保存；

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

产品说明：

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯yi能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

操作步骤：

一、 葡萄糖提取：

组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，

25℃离心 10min，取上清液备用。细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4 个）：蒸馏水体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），95℃水浴 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。

二、 测定步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。

2、混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。

3、加样表（在 EP 管/96 孔板中加入下列试剂）：

试剂（μL）       空白管       标准管       测定管

样本                                        20

试剂一                         20

蒸馏水             20

混合试剂           180         180           180

混匀，置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中，保温15min，于505nm 波长处读取第 2 页 共 2 页第 3 页 共 2 页吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为A1、A2 和A3。空白管和标准管只要做一管。

三、 葡萄糖含量计算：

1、按样本蛋白浓度计算

葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。

2、按样本鲜重计算

葡萄糖含量（μmol/g 鲜重）= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

3、按细菌或细胞密度计算

葡萄糖含量（μmol/ 10 4 cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)

=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

C 标准：标准管浓度，0.5μmol/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。

注意：zui低检测限为50nmol/g 鲜重或0.5nmol/mg prot

原创作者：上海极威生物科技有限公司