一、 测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里

2． 设定好荧光分光光度仪：激发波长 485±10nm，散发波长 530±12.5nm，并置零

3． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 微升稀释液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液（5 次测定量），放在暗室里。然后进行下列操作。

二、 构建标准曲线

1． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管

2． 分别加入 xx 微升稀释液（Reagent B）到每个离心管

3． 移取 xx 微升标准液（Reagent C）到 1 号管，混匀

4． 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液（Reagent C）到 2 号管，混匀

5． 小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液（Reagent C）到 3 号管，混匀

6． 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液（Reagent C）到 4 号管，混匀

7． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表

管号      稀释液（Reagent B）      标准液（Reagent C）      标准 DNA 总量

1          xx 微升           xx 微升             xx 纳克/毫升

2          xx 微升           xx 微升 1 号管        xx 纳克/毫升

3          xx 微升           xx 微升 2 号管        xx 纳克/毫升

4             xx 微升             xx 微升 3 号管        xx 纳克/毫升

5           xx 微升          空对照                  0

8． 移取 xx 微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿

9． 加入 100 微升上述配制的标准液

10．室温下，孵育 5 分钟，避免光照

11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

12．重复实验步骤 8 至 11 四次

13．绘制标准曲线：纵座标（Y 轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X 轴）为 DNA 含量（纳克/毫升）

三、 样品检测

1． 移取 xx 微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿

2． 加入 100 微升待测样品

3． 室温下，孵育 5 分钟，避免光照

4． 即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

5． 根据标准曲线获得样品对应 RNA 含量（纳克/毫升）

注意事项

1． 本产品为 25 次操作，包括标准曲线测定

2． 整个操作须带手套，建议使用滤芯枪头，并格外小心，防止降解 RNA

3． 建议所有的操作用品属于 RNA 专用

4． 使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光

5． 孵育时，避免光照

6． 系统检测，标准曲线测定 1 次即可；如果仪器更换，则需要重新测定 1 次

7． 如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量

8． 盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖不会干扰检测3

9． 如果样品中含有 DNA，建议使用 5 单位 DNA 酶，37℃孵育 90 分钟预处理

10．本公司提供系列 RNA 检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定高度敏感

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号            名称                       规格

G&VS20129         RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒        20 次

G&VS20129A         染色液（Reagent A）                微升

G&VS20129B         稀释液（Reagent B）                毫升

G&VS20129C         标准液（Reagent C）                毫升

试剂盒订购信息

产品编号          产品名称                 规格

G&VS12046           DEPC 水                  500 毫升

G&VS12047           DMDC 水                 500 毫升

G&VS20016.1         DEPC 处理试剂盒               100 次

G&VS20016.2         DMDC 处理试剂盒               100 次

G&VS12039.1          RNA 样品储存液              50 毫升

G&VS12039.2          纯化 RNA 样品储存液          50 毫升

G&VS20101           mRNA 纯化树脂再生试剂盒         20 次

G&VS20127           RNA 比色法定量检测试剂盒          20 次

G&VS20129         RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒     20 次

原创作者：上海极威生物科技有限公司